Western Blot膜的選擇
Western Blot印跡常用的轉移膜主要是硝酸纖維素膜(Nitrocellulose Blotting Membranes,NC)和PVDF膜,此外也有用尼龍膜、DEAE纖維素膜做蛋白印跡。
選擇的根據主要有:
a. 膜與目的蛋白分子的結合能力(也就是單位面積的膜能結合蛋白的載量),以及膜的孔徑(也就是攔截蛋白的大?。?br />b. 不影響后續(xù)的顯色檢測(也就是適和用于所選的顯色方法,信噪比好);
c. 如果后繼實驗有其他要求,比如要做蛋白測序或者質譜分析,還要根據不同目的來挑選不同的轉移膜。
NC膜的生產原理
勻漿配比
購買回來的原料硝酸纖維素粒子是一種非常普遍的有機化學物,溶解形成混漿,在該漿體內,通過加入一定比例的試劑來調整后形成的膜的性質,一般主要包含表面活性劑/高分子聚合物/鹽離子/成型劑等溶解的一個緩沖體系內。不同的廠家加入的溶液配方不一樣,導致了產品的差異。
滾筒鋪膜
配好的勻漿通過滾筒,形成了一張薄膜,平攤在十分光滑的平面載體上。過程與造紙非常相似。
成型
當勻漿內的成型劑開始揮發(fā),膜逐步干燥成型。同時在這個過程中由于溫度比較高,有些廠家在這個過程采取了在密閉腔體內成型,同時補充配方溶液的形式,來避免一些有效成分的蒸發(fā)。
切割
通過以上步驟生產出來的膜是呈一個寬度極大的產品,寬度的大小直接和滾筒的大小相關,滾筒越大生產越方便,但設備的成本也越高.寬膜要經過切割才能成為我們購買到的25mm或18mm(或20mm)寬的膜,而長度上,成品卷膜和寬膜的長度是相同的.理論上可以讓廠家切成你需要的任意寬度,但這樣會造成原料的浪費和人力成本的增加,后來廠商在和試紙生產廠家的協(xié)調過程中,綜合用料成本和生產便利性基本確定了上面說的寬度,以次為標準。
從生產過程,我們可以得知,NC膜本身已經添加了表面活性劑來改善親水能力,而且已經存在有一定的緩沖系統(tǒng)(雖然對紙條測試影響不會很大)。